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⑷所用试用剂都应该以大体积配制，实验一下看试用剂是否满意，然后分装成仅够一次使用的量进行贮存。⑸所有试用剂和样品准备过程中都要使用一次性灭去菌的瓶子和管子。⑹新配制的试用剂在用于准备新的标本之前应该加以检验。⑺样品准备和前PCR区所使用的移液管在不使用时都应该小心保存。5、在前PCR区建立PCR混合物。

由于该检测方法可以测出普通检验难以检测出的病、毒并具有灵敏度高、特异性高、快捷、对样品要求低等优点，因此被临床医生广为认可，广泛应用于院的临床诊断和各防疫检测部门的禽疫病诊断。但是，这种实验需要有能保证十分安全、配置合理的实验室和非常规范的操作为前提。近年来对临床Gene扩增检验实验室的建设越来越得到重视，因为它对检测结果的可靠性、准确性和安全性起到至关重要的作用。

在巢式PCR测定中，通常在一轮扩增后必须打开反应管，因此巢式扩增有较高的污染***性，第二次加样必须在本区内进行。本区的压力梯度要求为：相对于邻近区域为负压，以避免溶胶从本区漏出。为避免气溶胶所致的污染，应尽量减少在本区内的不必要的走动。个别操作如加样等应在超净台内进行。2.4扩增产物分析区：该区域主要进行的操作为扩增片段的测定。如使用全自动封闭分析仪器检测，此区域可不设。本区是尤为主要的扩增产物污染来源，因此对本区的压力梯度的要求为：相对于邻近区域为负压，以避免扩增产物从本区扩散至其它区域。